La preparación de muestras embrionarias y tejidos para su análisis microscópico es un proceso que requiere precisión y atención al detalle. El objetivo principal es transformar una muestra biológica en un bloque sólido que permita obtener cortes extremadamente finos para su examen.
1. Recepción y examen macroscópico
Tras la extracción, el espécimen se coloca en un envase con formalina u otro líquido conservante. En el laboratorio, el patólogo realiza un examen macroscópico, registrando tamaño, color y consistencia. Este paso es crucial para sugerir un diagnóstico preliminar y decidir qué partes de la muestra son más relevantes para el análisis microscópico.
2. Fijación del tejido
Las muestras deben ser manipuladas con cuidado y fijadas lo antes posible para evitar daños. El fijador (como el formol tamponado con fosfato) penetra en el tejido, endureciéndolo y preservando su estructura química. El tiempo de fijación óptimo oscila entre 6 y 24 horas para alcanzar el equilibrio químico necesario.
3. Procesamiento: Deshidratación y Aclarado
Dado que la cera de parafina es hidrófoba y no miscible con el agua, el tejido debe someterse a una serie de pasos preparatorios:
- Deshidratación: Se sumerge la muestra en series de etanol de concentración creciente hasta alcanzar alcohol puro. Es fundamental que sea un proceso gradual para evitar retracciones o fragilidad.
- Aclarado: Como el etanol y la parafina son inmiscibles, se utiliza un disolvente intermedio (agente aclarante) como el xileno, tolueno o benceno. Este paso otorga transparencia al tejido y facilita la entrada de la parafina.
4. Infiltración e Inclusión en parafina
La infiltración consiste en sumergir el tejido en parafina fundida (típicamente a 60 °C). Posteriormente, se procede a la inclusión en un "centro de inclusión":
- Se coloca la muestra en un molde con parafina fundida, orientándola cuidadosamente según el plano de corte deseado.
- Se coloca un casete sobre el molde y se rellena con más parafina.
- El bloque se enfría en una placa fría hasta solidificarse.
Una vez solidificado, el bloque está listo para ser cortado en láminas de entre 5 y 15 μm mediante un micrótomo.
Consideraciones sobre el tiempo de espera
Aunque es posible dejar las muestras en parafina líquida tras el procesamiento inicial, se recomienda realizar la inclusión lo antes posible. Si se retrasa, es esencial mantener el tejido en un ambiente controlado (cerca de los 60 °C) para evitar la deshidratación, la exposición al aire o la oxidación, factores que comprometerían la calidad del diagnóstico histológico.
Inclusión en parafina
Normativas y conservación
Los laboratorios están regulados por normativas como las CLIA (Enmiendas para la Mejora de los Laboratorios Clínicos), que exigen la conservación de muestras durante un período mínimo. Estos bloques y portaobjetos son vitales para segundas opiniones o comparaciones futuras con nuevos tejidos.
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